8500پ

كارشناسي ارشد

بيوشيمي

دانشگاه پيام نور

1392

26/09/1392

عالي

137ص

بهاروند، حسين

حاج حسيني،رضا

124-118ص

مرادمند، آزاده , عنوان , دانشگاه پيام نور/ تهران شرق

در طي تكوين مهره‌داران، اندودرم قطعي خواستگاه اندام‌هاي مهمي چون كبد،پانكراس و ريهاست كه از لحاظ درماني و به خصوص سلول درماني اهميت زيادي دارند.براي توليد هر يك از اين سلول‌ها از منبع سلول‌هاي بنيادي جنيني و با در نظر گرفتن مكانيسم‌هاي شناخته‌شده in vivo، بايد ابتدا سلول‌هاي بنيادي جنيني را به سلول‌هاي اندودرم قطعي تمايز داد كه در حال حاضر براي انجام اين تمايز مشكلاتي وجود دارد؛ از آن جمله 1) دشواري‌هاي مربوط به تشخيص اندودرم توليدشده و2) خالص نبودن اندودرم توليدشده. يكي از راهكارهاي نوين براي بهبود كيفيت روش‌هاي تمايز سلول‌هاي بنيادي جنيني به اندودرم و نيز خالص كردن اندودرم توليدشده، توليد رده‌هاي سلول‌هاي بنيادي جنيني گزارشگر است. در اين طرح ابتدا وكتوري كه دربردارنده ژن EGFP(ژن گزارشگر) و ژن مقاومت به آنتيبيوتيك پورومايسين تحت پروموتور ژن Sox17 (ژن مختص سلول‌هاي اندودرمي) است ساخته شدو سپس اين وكتور به سلول‌هاي بنيادي جنيني وارد شد. سپس، مراحل انتخاب كلني¬هاي مقاوم به آنتي بيوتيك و ارزيابي ژنوتيپي كلني¬هاي انتخاب شده انجام گرديد و سلول¬هاي داراي ژنوتيپ صحيح مورد ارزيابي فنوتيپي قرار گرفتند. به منظور ارزيابي فنوتيپي، اين سلول‌هاي بنيادي جنيني تراريخته توسط القا با فاكتور رشد اكتيوين A (25 نانوگرم بر ميلي‌ليتر) به اندودرم قطعي تمايز داده و با بررسي نحوه بيان پروتئين EGFP در روزهاي مختلف تمايز و نيز سنجش بيان ژنهاي EGFP و Sox17 به روش time RT-PCRRealكلوني مناسب از لحاظ بروز فنوتيپ دلخواه نيز انتخاب گرديد. بدين ترتيب در طي اين مطالعه سلولهاي بنيادي جنيني موشي تراريخته گزارشگر براي ژن Sox17 توليد گرديد كه مي تواند براي انجام مطالعات تمايز سلول هاي بنيادي و نيز ژنتيك و بيوشيمي تكوين اندودرم در مهره دارن مورد استفاده قرار گيرد.

فصل اول: كليات تحقيق. فصل دوم: مباني نظري و پيشينه تحقيق. فصل سوم: روش تحقيق. فصل چهارم: يافته هاي تحقيق. فصل پنجم: نتيجه گيري و ارائه پيشنهادات

9803