بررسي و ارزيابي خصوصيات فركشن3 و تعيين ساختاراجزاي توكسيك F3 زهر مار ناجا ناجا اكسيانا

كارشناسي ارشد

زيست شناسي بيوشيمي

تهران شرق

1399

تاريخ ثبت در تهران شرق دوشنبه 1402/12/14

صحافي شده ندارد

محبوبه طالبي

دانشگاه پيام نور مركز تهران شرق

امروزه زهر جانداران سمي از اهميت زيادي برخوردار هستند. براي اينكه قابليت توليد طيف وسيعي از مولكول‌هايي كه تأثيرات وسيعي براي اهداف دارويي از جمله سيستم عصبي، ماهيچه، قلب، جريان خون، سرطان و آنتي باكتريال دارد و داراي كاربردهايي در طراحي دارو و زيست فناوري مي‌باشد. دانشمندان بر اين باورند كه هنوز اسرار ناشناخته‌اي در زهر مار نهفته است و قابل پيش بيني است كه برخي از پپتيدها يا پروتئين هاي موجود در تركيب زهرها در صورت خالص سازي و شناسايي كامل ، بعنوان كانديد خوبي براي اهداف دارويي مورد استفاده قرار گيرند. هدف از اين مطالعه، خالص سازي پروتئين موجود در زهر مار ناجا ناجا اكسيانا بوده و شناسايي سا ختار اجزاء توكسيك آن مي باشد. زهر خام مار ناجا ناجا اكسيانا بصورت پودر خشك از انستيتوي رازي تهيه شد. خالص سازي اجزاء زهر خام با استفاده از كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون(Sephadex G-50) ، تعويض آنيوني (DEAE Sepharose) ، تعويض كاتيوني(CM Sepharose) و كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا (C18, 150×4.6 mm) صورت پذيرفت. جزء مورد نظر خالص و شناسايي گرديد. ميزان پروتئين در هر مرحله با استفاده از روش پروتئين سنجي لوري اندازه گيري شد و توكسيسيتي آن از طريق تزريق داخل وريدي دردم موش ها (18-20گرم)، تعيين گرديد.در اين مطالعه،از زهر خام با استفاده ازكروماتوگرافي ژل فيلتراسيون ،پنج فركشن 〖F_(1 ).F〗_(2 ).F_(3 ).F_(4 ).F_(5 ) جداسازي گرديد. تنها فركشن 3 و فركشن4 داراي خاصيت توكسيك بودند. فراكشن3 براي خالص سازي بيشتر توسط كروماتوگرافي تعويض آنيوني انتخاب گرديد و 4 فركشن(F3_(1 ).F3_(2 ).F3_(3 ).F3_(4 ) ) در اين مرحله بدست آمد. F3_(1 ) داراي فعاليت توكسيسيتي قوي تري بود و براي خالص سازي بيشتر توسط كروماتوگرافي تعويض كاتيوني انتخاب شد و 7زيرفركشن (F〖31〗_(1 ).F〖31〗_(2 ).F〖31〗_(3 ).F〖31〗_(4 ).F〖31〗_(5 ).F〖31〗_(6 ). F〖31〗_(7 ) )در اين مرحله حاصل گرديد. زير فركشن هاي (F〖31〗_(4 ). F〖31〗_(7 ) )توكسيك بودند. F〖31〗_(4 )بدليل اينكه بيشترين توكسيسيتي را نسبت به فركشن ديگر دارا بود براي خالص سازي بيشتر با كروماتوگرافي مايع فـــاز معكوس انتخـــاب شــد و 9 فركشــن( F〖314〗_(1 )، F〖314〗_(2 )، F〖314〗_(3 )، F〖314〗_(4 )، F〖314〗_(5 )، F〖314〗_(6 )، F〖314〗_(7 ) و…) بدست آمد كه كه دو فركشن F〖314〗_(6 ) و F〖314〗_(7 )توكسيك بودند. از آنجايي كه توكسيك ترين فركشن مدنظر بود و از طرفي فراكشن 6 به مقدار بسيار ناچيز جمع آوري شده است و در فرايند كروماتوگرافي مايع ارزش جمع آوري ماده جهت بررسي را نداشت، بنابراين فراكشن 7 كه بزرگترين و توكسيك ترين پيك حاصل از كروماتوگرافي نيز محسوب مي شد جهت تعيين توالي انتخاب شد. وزن مولكولي بدســت آمـده از روش LC-MS ، 9/6 كيلو دالتون بود. نتيجه بررسي توسط MALDI TOF توالي اوليه پروتئين را بدست آورد. كليد واژه ها: ناجا ناجا اكسيانا- زهرمار- خالص سازي- كروماتوگرافي-تعيين ساختار

74730