14457پ

كارشناسي ارشد

زيست شناسي بيوتكنولوژي ميكربي

تهران شرق

1402

تاريخ ثبت در تهران شرق شنبه 1402/5/14

صحافي شئه ندارد

فاطمه خادمي

دانشگاه پيام نور مركز تهران شرق

اين مطالعه با هدف جداسازي گونه هاي باسيلوس گرمادوست آنزيم-آميلاز از چشمه آبگرم واقع در استان كرمانشاه و بررسي قابليت توليد آنزيم آلفا-آميلاز در اين گونه ها انجام شده است. جهت جداسازي و شناسايي اوليه ميكروارگانيسم هاي داراي فعاليت آميلوليتيك ابتدا محيط پايه و سپس از محيط حاوي نشاسته استفاده شد. از باكتري هاي رشد يافته در محيط كشت، لام تهيه شد و پس از رنگ آميزي گرم، مشاهده ميكروسكوپي و مورفولوژيكي باكتري ها، آزمون هاي بيوشيميايي انجام شد. كلوني تك و خالص شده با كشت در محيط حاوي نشاسته و پس از 24 ساعت رشد در اين محيط، با استفاده از محلول يديد پتاسيم(لوگل) به منظور تشخيص فعاليت آميلوليتيك و ايجاد هاله شفاف در اطراف باكتري، مورد ارزيابي قرار گرفت. با تكثير ژن 16s RNA به روش PCR و تعيين توالي، گونه باكتري مشخص شد. مطابق توالي يابي صورت گرفته، باكتري خالص شده بيشترين قرابت را با گونه هاي Bacillus. Licheniformis نشان داد. سنجش فعاليت آنزيم با استفاده از معرف DNS، بهينه فعاليت را در دماي 70 درجه سانتي گراد و pH معادل 7 داشته است. در تخليص آنزيم با استفاده از كروماتوگرافي تعويض يون DEAE-سفارز، خالص سازي حدود پنج برابر نسبت به مايع رويي محيط كشت(سوپرناتانت) صورت گرفت و بر اساس الكتروفورز SDS-PAGE ، وزن مولكولي آنزيم آلفا-آميلاز 30 كيلو دالتون تخمين زده شد و با توجه به كروماتوگرام انجام شده(TLC) آنزيم قادر است در فواصل زماني انكوباسيون از 30 دقيقه تا 18 ساعت، نشاسته را به مالتوز و گلوكز تجزيه نمايد و بهينه زمان تجزيه نشاسته به مالتوز و گلوكز در 18 ساعت انكوباسيون تشخيص داده شد.

72852