3276پ

Cloning and Fusion Gene Expression of ML1-stxB in E. coli

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي كشاورزي

دانشگاه پيام نور كرج

1395

1395/9/24

بسيارخوب

130ص.

هنري ، حسين

ابراهيمي ، محمدعلي

92-112

Mistletoe; Gene; Cloning; Shigella; toxin; cancer

دارواش گياهي است از خانواده Santalaceae و نام علمي آن (Viscum album L) ويسكومينML1 مي باشد. با توجه به توانايي آن براي جذب مواد مغذي از گياه ميزبان، آنرا به عنوان يك گياه نيمه انگلي مي شناسند. سموم دارواش از نوع گروه AB بوده كه از عصاره گياهي آن استخراج مي شود. دارواش داراي سه سم لكتيني MLIII MLI, MLII, از نوع (type 2 ribosome-inactivating proteins) بوده كه از لحاظ جرم مولكولي و كربوهيدرات متفاوت مي باشند. كميت نسبي DNA سه ژن ml1p، ml2p و ml3p با يكديگر متفاوت بوده كه به ترتيب 5/1: 1: 4 برابر مي باشد. نسبت mRNA آنها در گياه به ترتيب 50 ، 10 ، 1 مي باشد. ميزان بيان ژن ها در گياه دارواش متفاوت بوده و ميزان پروتئين MLI بيشتر از سموم ديگر مي باشد. شيگا توكسين خود خانواده اي از سموم دو زير واحدي AB را تشكيل مي دهند كه داراي شباهت هاي عملكردي و ساختاري زيادي هستند . هدف اين مطالعه، بيان ژن ML1-StxB در E. coli و بررسي تيتر آنتي بادي آن در موش مي باشد. ژن صناعي در پلاسميد pUC57 از شركت نداي فن خريداري شد. پلاسميد pUC57 حاوي ژن ML1 با جايگاه هاي آنزيمي BamHI و SalIدر وكتور بياني pET28a(+)-StxB زيرهمسانه سازي گرديد و به باكتري E. coli سويه BL21(DE3) تراريخت(ترانسفورم) شد. بيان ژن ءML1-StxB تحت القايIPTG انجام گرديد. در اين مطالعه، ژن ML1-StxB كلون شده در وكتور بياني pET28a(+) به وسيله ي PCR و آناليز آنزيمي تأييد گرديد. همچنين پروتئين نوتركيب توليد شده به وسيله SDS-PAGE و لكه گذاري وسترن تاييد شد.سپس آنتي بادي توليد شده از سرم موش جداسازي و توسط تست الايزا تاييد گرديد. با توجه به خصوصيات آنتي ژني ML1 و خاصيت دليوري و ادجوانتي STxB اين پروتئين بعنوان يك ماده ضد سرطان و كانديداي واكسن مطرح مي باشد كه در اين تحقيق ساخت كاست ژني ML1- StxB مورد نظر بوده و در باكتري E. coli بيان شد.

1398/7/28

57288