پ.م.ك.۱۵۸۹

study of Transformation of Anthurium sp. Plant with LUC gene by Agrobacterium method

كارشناسي ارشد

كشاورزي -بيوتكنولوژي كشاورزي

مركز كرج

۸۹

۸۹/۰۹/۱۵

عالي

۱۲۳ص.

جلالي جواران، مختار؛ بابايي، عليرضا

بخشي خانيكي، غلامرضا

ص:۱۱۸-۱۲۳

پ استاد راهنما جلالي جواران، مختار؛ بابايي، عليرضا , پ استاد مشاور بخشي خانيكي، غلامرضا

آنتوريوم يكي از گياهان زينتي و تجاري بسيار مهم مي باشد. به همين دليل امروزه كشت بافت وانتقال ژن به اين گياه از اهميت ويژه اي برخوردار است. انتقال ژن به اين گياه، به روش اگروباكتريوم معمولا از طريق ريز نمونه هاي برگ بدست آمده، از گياهچه هاي توليد شده در شرايط آزمايشگاهي صورت گرفته است. همچنين از بين ژن هاي گزارشگر( Reporter genes ) مورد استفاده در مهندسي ژنتيك، ژن لوسيفراز(LUC) به منظور بهينه سازي سيستم انتقال ژن، كاربرد فراوان دارد. تحقيق حاضر جهت انتقال ژن لوسيفراز حشره شبتاب گونه ايراني Lampyris turkestanicus با تابش نور قرمز(LUC ff-) توسط باكتري اگروباكتريوم ( Agrobacterium tumefaciens) سوش(LBA 4404 ) به گل آنتوريوم، براي بهينه سازي سيستم انتقال ژن به اين گياه صورت پذيرفت. ريز نمونه هاي برگ حاصل از گياه مادري در محيط درون شيشه كشت شده و بعد از بدست آمدن گياهچه هاي درون شيشه اي، برگهاي مناسب به عنوان ريزنمونه اوليه براي آلوده سازي با اگروباكتريوم ونهايتاً باززايي در محيط مخصوص قرار گرفتند. محيط حاوي 1/0ميلي گرم بر ليتر 2,4-D و5/0ميلي گرم برليتر BAو پينه هاي حاصل از برگ جوان بهترين نتيجه را براي باززايي داشت. پس از بدست آوردن گياهچه هاي مناسب درون شيشه اي، برگهاي مناسب از آنها جدا شده و با اگروباكتروم سويه LBA4404 حاوي ناقل بياني pCAMBIA1304 آلوده شدند. ريزنمونه هاي تلقيح شده، براي باززايي گياه به محيط كشت انتخابي نيچ حاوي آنتي بيوتيك هاي هيگرومايسين (براي انتخاب سلول هاي تراريخت) و سفوتاكسيم (براي كنترل باكتري) منتقل شدند. گياهچه هاي باززايي شده بر روي محيط كشت انتخابي، جدا سازي و به محيط كشت فاقد آنتي بيوتيك انتقال يافتند. در نهايت گياهچه هاي ريشه دارشده به پرليت استريل منتقل و پس از سازگار نمودن به گلدان هايي با خاك مناسب منتقل شدند. بررسي مولكولي PCR با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي ژن لوسيفراز، بر روي DNA ژنومي استخراج شده از گياهان باززايي شده صورت پذيرفت و تراريخت بودن آنها را تائيدگرديد.

۹۷/۱۲/۱۱

كشت كار، زهرا

51149