1580پ

Improvement in biocontrol activity of Bacillus subtilis UTB1 against Aspergilus flavus using gamma – irradiation

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي كشاورزي

دانشگاه پيام نوركرج

1395

1395/11/11

عالي

96ص.

ابراهيمي ، محمدعلي - افشارمنش ، حميده

شهبازي ، سميرا

69-79

Mutation, Gamma irradiation, Biological Control, Environmental stresses, Aspergillus flavus, Bacillus

قارچ آسپرژيلوس فلاووس به عنوان متداول ترين قارچ آلوده كنندة محصولات كشاورزي و مواد غذايي شناسايي شده است. سم توليد شده توسط اين قارچ آفلاتوكسين نام دارد كه بسيار سمي و جهش زا مي باشد. كنترل بيولوژيك با ميكروارگانيزم هاي جدا شده از محيط طبيعي بيمارگر مي تواند روش اميد بخش در كنترل آفلاتوكسين در مرحله قبل و بعد از برداشت باشد. در تحقيق حاضر به منظور بهبود توانايي بيوكنترل سويهBacillus subtilis UTB1 عليه قارچ A. flavus از جهش تصادفي با استفاده از پرتودهي گاما بهره گرفته شد. فعاليت آنتاگونيستي كلوني هاي انتخاب شده از دزهاي مختلف پرتودهي (100 تا 3000 گري) عليه قارچ A. flavus با آزمون كشت متقابل بررسي شد كه نتايج نشان داد فعاليت آنتاگونيستي در 9 درصد كلوني ها نسبت به سويه مادري UTB1 افزايش معني داري داشته است. به منظور غربالگري كلوني هاي انتخاب شده از كشت متقابل، انگشت نگاري DNA به روش rep-PCR انجام شد كه الگوي پلي مورفيسم نشان داد سويهUTB1 با هشت كلوني اختلاف ژنتيكي نشان مي دهد. استخراج ليپوپپتيدهاي غيرريبوزومي از هشت جهش يافته منتخب ازrep-PCR و به دنبال آن كروماوگرافي لايه نازك نشان داد سويه وحشي UTB1و هشت جهش يافته فوق قادر به توليد سه خانواده اصلي از ليپوپپتيدهاي سورفكتين، ايتورين و فنجايسين هستند كه ميزان آنها در شش جهش يافته M562,M523, M464, M458,M455, M425, M419, M600 افزايش قابل توجهي نسبت به سويهUTB1 نشان دادند. با انجام بيواتوگرافي با استفاده از A. flavus، ممانعت قابل توجهي از رشد قارچ در شش جهش يافته فوق مشاهده شد كه با توجه به ميزان ضريب نگهداري هاله بازدارندگي ايجاد شده، متعلق به ليپوپپتيدهاي خانواده ايتورين مي باشد. تحمل سويه وحشي UTB1 و شش جهش يافته منتخب نسبت به تنش هاي محيطي" دما، خشكي، شوري و اسيديته" مورد بررسي قرار گرفت. نتايج تنش دمايي نشان داد كه با افزايش دما تا 50، 52 و 55 درجه سلسيوس ميزان رشد باكتريها كاهش يافت، به طوريكه در دماي 55 درجه سلسيوس تنها سويه UTB1 و جهش يافته M419 رشد ضعيفي نشان دادند. يافته هاي حاصل از تنش خشكي در محيط كشت حاوي 50، 55 و 65 درصد پلي اتيلن گليكول نشان داد كه دو جهش يافته M464 و M425بعد از يك هفته قادر به رشد بيشتري نسبت به ساير جدايه ها در محيط خشك بودند. نتايج تنش شوري نشان داد كه ميزان رشد M419 نسبت به ساير جدايه ها در محيط حاوي 11 درصد كلريد سديم بيشتر بود. در شوري 15 درصد هيچ يك از باكتريها رشدي نكردند. نتايج حاصل از تنش اسيديته در محيط هاي با pH، 9، 10 و 11 نشان داد كهM419 و M464 بترتيب بيشترين تحمل را به pH=11نسبت به سايرجدايه ها دارند.

1396/7/3

42838