1541پ

Gene cloning an​d functional characterization of Lycopene beta- cyclase from Streptomyces griseus in E.coli

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي كشاورزي

دانشگاه پيام نور كرج

1393

1393/6/30

عالي

79ص.

شهباني ظهيري ، حسين - اكبري نوقابي ، كامبيز

ابراهيمي ، محمدعلي

55-60

ژن crtY از باكتري استرپتومايسس با روش PCR تكثير شد و با 2 آنزيم BamHI و HindIII برش داده شد. اين ژن طي واكنش اتصال در حامل pET26b كه با همان آنزيم‌ها برش خورده و تخليص شده بود با موفقيت همسانه سازي و توسط شوك حرارتي به ميزبان همسانه سازي DH5α وارد شد. صحت واكنش اتصال به وسيله‌ي PCR و برش آنزيمي تاييد شد. سپس حامل نوتركيب جديد به همراه حامل pTLYcm4 كه توليد كننده ليكوپن است ( شهباني و همكاران 2006) به ميزبان بياني rosetta (DE3) منتقل شد. تبديل رنگ قرمز باكتري توليدكننده ليكوپن به نارنجي نشان دهنده‌ي بيان ژن crtY و عملكرد آنزيم ليكوپن بتاسيكلاز مي‌باشد. بتاكاروتن توليد شده با استفاده از استون و دماي 55 درجه سانتيگراد از باكتري استخراج شد و با استفاده از كروماتوگرافي لايه نازك TLC و طيف سنجي به تاييد رسيد. نتايج حاصل از اين دو آزمايش خلوص بتاكاروتن توليد شده را تاييد كرد و نشان داد تمام ليكوپن توليد شده توسط حامل pTLYcm4 بلافاصله توسط حامل نوتركيب جديد pETcrtY به بتاكاروتن تبديل مي‌شود. توليد بتاكاروتن بر اساس دما، بهترين زمان القا و همچنين بهترين غلظت IPTG بهيه سازي شد. جهت بررسي اثر آنتي‌اكسيدانتي بتاكاروتن اين سلول‌ها با H2O2 تيمار شدند و مقاومت اين باكتري به غلظت 70 ميلي مولار H2O2 به تاييد رسيد. مقايسه ميزان رشد باكتري نوتركيب با باكتري كنترل نشان داد بتاكاروتن با اثر ضد پيري خود سبب افزايش رشد باكتري مي‌شود.

1396/6/27

42720