پ.م.ك.470

Extraction & Purification of Nucleoprotein of influenza H9N2 virus

كارشناسي ارشد

كشاورزي

مركز كرج

94

116ص.

مدني، رسول

گلچين فر، فريبا

ص:113-116

پ استاد راهنما مدني، رسول , پ استاد مشاور گلچين فر، فريبا

بيماري آنفلوانزاي پرندگان سالانه خسارت اقتصادي فراواني به صنعت طيور در سراسر دنيا وارد مي كند. آنفلوانزاي پرندگان بيماري بسيار واگيرداري است كه موجب بروز علايم در سيستم¬هاي تنفسي، گوارشي و اعصاب در طيف وسيعي از پرندگان مي گردد و قابل انتقال به پستانداران از جمله انسان مي¬باشد. ويروس آنفلوانزا، ويروسي پلي مورفيك از خانواده ارتوميكسوويروس¬ها است و اين ويروس با ژنوم RNA تك رشته اي، داراي 8 نوع پروتئين ساختاري و 2 نوع پروتئين غير ساختاري بوده و نوكلئوپروتئين (NP) از پروتئين¬هاي ساختاري و داخلي ويروس مي باشد. اين تحقيق به منظور معرفي روش ساده و كاربردي و سريع جهت جداسازي نوكلئوپروتئين ويروس آنفلوانزاي پرندگان صورت پذيرفت. پروتئين خالص شده را مي¬توان به منظور تهيه آنتي سرم اختصاصي نوكلئوپروتئين استفاده نمود. به اين منظور ابتدا ويروس آنفلوانزاي پرندگان N_2 H_9 جداشده از مايع الانتوئيك تخم مرغهاي جنين دار 10 روزه را سانترفيوژ و با استفاده از پلي اتيلن گليكول 6000 و با وزن حجمي 10% و گراديانت سوكوروز در شيب 60-30 درصد ويروس تخليص گرديد. با استفاده از دستگاه Preparative electrophoresis(Prepcell 491) پروتئين¬هاي ويروس آنفلوانزا جداسازي و به صورت فراكسيونهايي تهيه شد. ميزان جذب پروتئين فراكسيون ها با دستگاه اسپكتوفوتومتر در nm280 مشخص شده و فراكسيونهاي داراي جذب، ليوفريزه گرديد و سپس آناليز پروتئين با SDS-PAGE و رنگ آميزي نيترات نقره مشخص نمود كه نمونه هايي بدست آمده موردنظر حاوي نوكلئوپروتئين خالص بوده و عاري از ساير پروتئينهاي ويروس است. نتايچ بررسي فراكسيونهاي ليوفريزه شده حاوي نوكلئوپروتئين روي ژل اگار عدم حضور RNA ژنوم ويروس همراه با نوكلئوپروتئين و خلوص بالاي نوكلئوپروتئين را نشان داد.

23/08/95

كشت كار، زهرا

38653