پ.م.ك.497

Study of recombinant amylopulanase Coh4159 from Cohnella

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي

مركز كرج

93

15/06/93

عالي

112ص.

فرخي، ناصر

ابراهيمي، محمدعلي

ص:106-112

پ استاد راهنما فرخي، ناصر , پ استاد مشاور ابراهيمي، محمدعلي

وجود مسير هاي چرخه گليكوليز در موجودات نشان مي دهد گلوكز يك منبع مهم و اصلي انرژي است. از بين پليمرهاي گلوكز، نشاسته در صنعت كشاورزي و پزشكي از اهميت ويژه اي برخوردار است و از آنجا كه اكثر موجودات قادر به هضم اين پليمر نمي باشند آنزيم هاي هيدروليز كننده نشاسته از اهميت ويژه اي برخوردار هستند. يكي از اين آنزيم ها آنزيم آميلوپلولاناز مي باشد، آميلو پلولاناز يكي از مهمترين گروه هاي كاتاليزورهاي زيستي مي باشند كه در صنايع مختلفي كاربرد دارند. باكتري ترموفيل بومي Cohnella sp . A01 داراي دماي بهينه رشد 60 درجه سانتي گراد مي باشد، انتظار مي رود كه آميلوپلولاناز اين باكتري پايداري دمايي بالايي داشته باشد. آميلوپلولاناز يكي از اعضاي خانواده هاي گروه 13 و 57 گليكوزيل هيدرولازها مي باشد. اين آنزيم داراي فعاليت آميلوپلولانازي بوده و نشاسته را به واحدهاي پلي ساكاريد هيدروليز مي كند. در اين تحقيق ابتدا DNA باكتري Cohnella sp A01 استخراج شد و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن مورد نظر طي واكنش PCR تكثير شده در ناقل بياني PET 26 b(+) همسانه سازي گرديد و بيان پروتئيني آن در باكتري اشريشياكولي (DE) صورت گرفت. در نهايت در شرايط بهينه، پروتئين در مقياس بالا تهيه و با استفاده از دنباله هاي هيستيديني موجود در وكتور بياني اضافه شده به آغاز گرها و ستون نيكل سفارز خالص سازي شد و فعاليت آنزيم در نشاسته و پلولان به عنوان سوبسترا تاييد گرديد. پايداري آنزيم توليدي ، پس از تلخيص آن در برابر تغييرات دما، PH، فلزات يوني و مواد شيميايي مختلف ارزيابي شد. فعاليت آنزيم در حضور اكثر يون هاي فلزي، بازدارنده ها بررسي شد. اين آنزيم در زير ساختار وسيعي از PH (9 – 4) و دماي (30 – 70 C) كاملا فعال بوده و بيشترين فعاليت را در PH = 6 و دماي 60C نشان داد.

11/07/95

كشت كار، زهرا

35069