پ.م.ك.480

Recombinant Production And Purification Of A Novel L-asparaginase In E.Coli

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي

مركز كرج

94

24/06/94

عالي

105ص.

ابراهيمي، محمدعلي

توحيد فر، مسعود

ص:93-105

پ استاد راهنما ابراهيمي، محمدعلي , پ استاد مشاور توحيد فر، مسعود

آنزيم ال-آسپاراژيناز به شكل مؤثري در درمان بيماري لوسمي لنفوبلاستيك حاد و سلول¬‌هاي توموري و همچنين در صنايع غذايي براي كاهش سطح اكريل‌آميد به¬كار مي‌رود. بيماري لوسمي لنفوبلاستيك حاد يكي از بدخيمي‌هاي بسيار شايع در جهان و ايران به¬ويژه در كودكان است و در طول سي سال گذشته با استفاده از آنزيم‌هاي ال-‌آسپاراژيناز كه به صورت تجاري ازE.coli و Erwinia cherysanthemi تهيه مي¬شود، ‌قابل درمان است. آنزيم ال-‌آسپاراژيناز واكنش تبديل ال-‌آسپاراژين كه يك اسيد‌آمينه غير ضروري است را به ال-‌آسپارتيك‌اسيد و آمونياك كاتاليز مي‌كند و بدين ترتيب اين اسيد‌آمينه، كه براي رشد بي‌رويه سلول‌هاي سرطاني ضروري است را از دسترس آن‌ها خارج مي‌كند. در اين پژوهش ژن ال- آسپاراژيناز با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي از باكتري گرمادوست و بومي ايران Ureibacillus thermosphaericus سويه Thermo BF جدا و در وكتور حد واسط pTZ57/RT همسانه سازي شد. در ادامه ژن ال- آسپاراژيناز از وكتور حد¬ واسط با استفاده از آنزيم‌هاي برشي Not1 , Nde1 جدا و در سايت همولوگ وكتور a))pET28 همسانه سازي شد. جهت بررسي بيان ژن از ميزبان بياني E.coli(BL21) استفاده شد. خالص سازي پروتئين مورد نظر با استفاده ازكيت خالص سازي پروتئين نوتركيب شركت كياژن Ni-NTA)) صورت گرفت. القاي بيان پروتئين نوتركيب با IPTG و آناليز كيفي و كمي بيان با ژل SDS-PAGE انجام شد. نتايج اخير حاكي از بيان موفق اين آنزيم در ميزبان بياني بود. وزن مولكولي آن حدود KD 37 بود. مشخصات مولكولي اين آنزيم به كمك آناليز¬هاي بيوانفورماتيكي، به منظور شناخت بهتر اين ژن و پتانسيل¬هاي احتمالي آن انجام گرفت.

10/07/95

كشت كار، زهرا

35012