546پ

Development of a Nano - ELISA system for the rapid an​d sensitive detection of avian influenza

كارشناسي ارشد

زيست شناسي گرايش بيوشيمي

دانشگاه پيام نور تهران شرق

1393

1393/9/16

عالي

116ص.

مدني ، رسول - حاجي حسيني ، رضا

گلچين فر ، فريبا

90-100

Influenza, ELISA, Gold nano particles

بيماري آنفلوانزا يكي از مهمترين بيماري هاي ويروسي است كه به صورت مشترك در بين پرندگان و پستانداران وجود دارد و توسط ويروس هاي خاصي كه عضوي از خانواده ي ارتوميكسو ويريده هستند ايجاد مي شود. مخزن اين بيماري پرندگان آبزي و مهاجر است و احتمال بروز اين بيماري در هر منطقه وجود دارد. روش هاي متفاوتي براي تشخيص آنفلوانزاي پرندگان موجود است ولي از نقطه نظر سرعت در تشخيص، الايزا يكي مهمترين روش هاي جاري مي باشد. با توجه به شيوع آنفلوانزاي حاد پرندگان در سال هاي گذشته در مناطق مختلف ايران و از طرفي مشكلات تشخيص اين بيماري صرفا بر اساس علائم باليني و كالبد شكافي، هدف از اين پژوهش طراحي يك سيستم الايزا بر پايه ي نانوذرات طلا جهت تشخيص سريع و حساس آنفلوانزاي مرغي مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه از ويروس آنفلو انزاي تحت تيپ H9N2 به عنوان آنتي ژن استفاده شد. ابتدا مقدار كل پروتئين ويروس به وسيله ي روش lowry پروتئين سنجي شد و از آزمون Checker board براي تعيين غلظت مناسب آنتي ژن جهتcoating به ته چاهك هاي ميكروپليت استفاده شد. همچنين آنتي بادي ثانويه با نانوذرات طلا نشاندار شد و رقت بهينه آنتي باي ثانويه نشاندار شده با نانو ذرات طلا نيز به وسيله ي همين آزمون تعيين گرديد. سپس با تعيين Cut off يك كيت نانو-الايزا طراحي شدو نمونه سرم هاي تهيه شده از موسسه ي تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي از نظر وجود آنتي بادي عليه ويروس مورد نظر بررسي شد و حساسيت و ويژگي كيت طراحي شده بدست آمد. نتايج: ويروس آنفلوانزاي مورد مطالعه داراي mg/ml 15/0 پروتئين بود .بهترين غلظت آنتي ژن براي كوتينگ برابر با μg/mL 1 و رقت بهينه براي آنتي بادي ثانويه ي نشاندار شده با نانو ذرات طلا 8/1 بود. از 133 سرم مورد مطالعه در اين پژوهش، 64 سرم منفي و 69 سرم مثبت بودند و با مقايسه ي اين نتايج با نتايج حاصل از آزمايش همين نمونه ها با كيت طراحي شده بدون نانو ذرات، حساسيت 100%و ويژگي 92٪ محاسبه شد. بنابراين اينگونه نتيجه گيري مي شود كه روش طراحي شده مي تواند يك روش تشخيصي مناسب براي ويروسH9N2 باشد.

1395/6/16

34132