03SB

Transformation of IrrE gene of Deinococcus radiodurans from Agrobacterium tumefaciens to Tobacco

كارشناسي ارشد

مهدسي كشاورزي

پيام نور مركز اصفهان

1394

1398

69

دكتر مهدي خزاعي دكتر مهرآنا كوهي

شوري خاك، يكي از مهمترين تنش‌هاي غيرزيستي است كه كاهش بهره وري كشاورزي را در بر داشته و سطح وسيعي از زمين هاي جهان را تحت تأثير قرار داده است، از اين‌رو توليد محصولات مقاوم به نمك ضروري به نظر مي‌رسد. يكي از روش هاي اصلي براي بهبود تحمل به نمك توليد گياهان تراريخته از طريق معرفي ژن هاي جديد و يا تغيير سطوح بيان ژن هاي موجود براي تغيير درجه تحمل تنش شوري است. بررسي ها نشان مي دهد كه ژن IrrE به عنوان يك سوئيچ براي كنترل مجموعه اي از ژن هاي متصل به مسيرهاي متابوليك و سيگنالينگ مختلف عمل مي كند و منجر به افزايش قابل توجه تحمل به نمك در ارگانيزم هاي اصلاح شده ژنتيكي حاوي اين ژن مي شود. در اين پژوهش ، به منظور انتقال ژن IrrE به گياه مدل تنباكو جهت ايجاد مقاومت به شوري،از سازه ي pBI121+IrrE درون باكتري E.coli كه در سال 2018توسط تيم تحقيقاتي دكتر خزاعيطراحي و ساخته شده،استفاده گرديد.اين سازه به روش استاندارد انجماد و ذوب به Agrobacteriumtumefacience سويه LBA4404 منتقل شد و حضور ژن IrrE توسط تكنيك colonyPCR تاييد شد. تلقيح به گياه تنباكو با روش قطعهبرگي(LeafDisk) انجام شد و نمونه هاي تراريخت شده در محيط حاوي گزينشگر كانامايسين جداشدند. پس از استخراج DNA، با استفاده از تكثير از طريقPCR حضور ژن IrrE در نمونه ها به اثبات رسيد. بر روي نمونه هاي تراريخت شده Real-TimePCR انجام شد و بيان ژن در اين نمونه ها تاييد شد

65897