پ.م.ك.1975

Evaluation of transient expression of human pro-insulin gene in tobacco at RNA level

كارشناسي ارشد

مهندسي كشاورزي- بيوتكنولوژي كشاورزي

مركز كرج

98

98/10/28

بسيار خوب

88ص.

جلالي جواران، مختار؛ شمس بخش، مسعود

ابراهيمي، محمد علي

ص:75-85

پ استاد راهنما جلالي جواران، مختار؛ شمس بخش، مسعود , پ استاد مشاور ابراهيمي، محمد علي

افزايش تعداد بيماران ديابتي در سطح جهان و اكتشاف روش‌هاي جايگزين انسولين مانند افشانه يا خوراكي كه نياز به دوزهاي بالاتر انسولين دارند، تقاضا براي انسولين نوتركيب را افزايش خواهد داد. بيان موقت ژن با روش اگرواينفيلتراسيون به دليل سرعت، سادهبودن، بي نياز به كشت بافت، قابليت توليد در سطح بالا در بافتهاي تمايزيافته و انعطافپذير بودن جايگزين مناسبي براي فن‌آوري‌هاي توليد فعلي انسولين (سيستم مبتني بر E. coli و مخمر) ميباشند. در اين تحقيق برگهاي توتون (N. bentamiana) در مرحله 8-6 برگي با واسطه سوسپانسيون سلولهاي اگروباكتريوم حاوي سازه pCAMBIA1304 ناقل توالي ژن پروانسولين انساني متصلشده به پروتئين A تحت كنترل پيشبرنده CaMV35S تلقيح شدند. به منظور مقايسه ميزان بيان ژن هدف، چهار، هفت و ده روز پس از تيمار از برگهاي توتون در سه سطح برگهاي بالائي (جوان)، مياني (بالغ) و پائيني (توسعه يافته) از برگهاي تيمار شده نمونهگيري صورت گرفت. توليد پروتئين نوتركيب به دليل خاموشي ژن پس از رونويسي تنها محدود به 2 الي 3 روز پس از آلودهسازي برگها مي‌باشد. براي افزايش بيان ژن از سركوبگر خاموشي ژن ويروسي P19 استفاده شد. نتايج آزمون qRT-PCR نسبي نشان از افزايش معنيدار (05/0>p) ميزان رونويسي ژن پروانسولين انساني در برگهاي بالائي چهار و هفت روز پس از تلقيح ژن در استفاده همزمان از سازه حاوي ژن سركوبگر خاموشي حضور P19 داشت.

99/11/28

كشت كار، زهرا

61899