3954پ

Transformation of IrrE gene of Deinococcus radiodurans from Agrobacterium tumefaciens to Tobacco

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي كشاورزي

دانشگاه پيام نور اصفهان

1398

1398/11/10

89ص.

خزاعي ، مهدي - كوهي ، مهرآنا

66-71

شوري خاك، يكي از مهمترين تنش‌هاي غيرزيستي است كه كاهش بهره وري كشاورزي را در بر داشته و سطح وسيعي از زمين هاي جهان را تحت تأثير قرار داده است، از اين‌رو توليد محصولات مقاوم به نمك ضروري به نظر مي‌رسد. يكي از روش هاي اصلي براي بهبود تحمل به نمك توليد گياهان تراريخته از طريق معرفي ژن هاي جديد و يا تغيير سطوح بيان ژن هاي موجود براي تغيير درجه تحمل تنش شوري است. بررسي ها نشان مي دهد كه ژن IrrE به عنوان يك سوئيچ براي كنترل مجموعه اي از ژن هاي متصل به مسيرهاي متابوليك و سيگنالينگ مختلف عمل مي كند و منجر به افزايش قابل توجه تحمل به نمك در ارگانيزم هاي اصلاح شده ژنتيكي حاوي اين ژن مي شود. در اين پژوهش ، به منظور انتقال ژن IrrE به گياه مدل تنباكو جهت ايجاد مقاومت به شوري،از سازه ي pBI121+IrrE درون باكتري E.coli كه در سال 2018 توسط تيم تحقيقاتي دكتر خزاعي طراحي و ساخته شده، استفاده گرديد. اين سازه به روش استاندارد انجماد و ذوب به Agrobacterium tumefacience سويه LBA4404 منتقل شد و حضور ژن IrrE توسط تكنيك colony PCR تاييد شد. تلقيح به گياه تنباكو با روش قطعه برگي ( Leaf Disk) انجام شد و نمونه هاي تراريخت شده در محيط حاوي گزينشگر كانامايسين جداشدند. پس از استخراج DNA، با استفاده از تكثير از طريق PCR حضور ژن IrrE در نمونه ها به اثبات رسيد. بر روي نمونه هاي تراريخت شده Real-Time PCR انجام شد و بيان ژن در اين نمونه ها تاييد شد.

1399/11/4

61660