8708پ

كارشناسي ارشد

زيست شناسي

دانشگاه پيام نور

1389

83ص

علومي، مانا؛ بوذري، سعيد

ناظم، حبيب الله

81-72ص

بيات، منيژه , عنوان , دانشگاه پيام نور/ تهران شرق

باكتري اشرشياكلي انتروهموراژيك از خانواده آنتروباكترياسه توليد كننده شيگاتوكسين (STEC) عامل اصلي بيماري عفوني ناشي از مواد غذايي است.علاوه، بر اين باكتري شيگاتوكسين توسط شيگلا ديسانتريه تيپ 1 و E. coli سروتيپ 0:157:H7 (EHEC) توليد مي‌شود. شيگاتوكسين ترشح شده از اشريشياكلي حتي در كشورهاي توسعه يافته نيز به عنوان يك مشكل بهداشتي مطرح مي‌باشند. شيگاتوكسين يا وروتوكسين داراي ساختمان AB5 است كه داراي زيرواحد A با فعاليت آنزيمي و زير واحد B كه پنتامر مي‌باشد و به گيرنده گليكوليپيدي سطح سلول يوكاريوت‌ها (Gb3) متصل شده و باعث انتقال زير واحد A به داخل سلول مي‌شود و همچنين از طريق فعاليت گليكوزيدازي - N-RNA با تخريب 28 srRNA سنتز پروتئين را مهار مي‌كند.توكسين فوق به صورت هولوتوكسين در ايجاد سيگنالهاي درون سلولي و برانگيختن آپوپتوزيس (مرگ سلولي برنامه‌ريزي شده) بر روي سلول‌ها مؤثر مي‌باشد. امروزه ساختارهاي نوتركيب اين توكسين و زير واحدهاي آن به منظور مشخص نمودن مسيرهاي دقيق درون سلولي و سيگنالهاي آپوپتوزيس در دست بررسي هستند و براي هر چه بيشتر مشخص‌تر شدن نقش هر كدام از زير واحدها در اين پروسه نياز به مطالعات كاملتر با تكيه بر ساختارهاي نوتركيبي كه به صورت مجزا توليد زير واحدها را ممكن مي‌سازد انجام گرفت. اين مطالعات در ادامه پژوهشهاي قبلي كه بر ساخت شيگاتوكسين نوتركيب و زير واحدهاي آن در باكتري ميزبان TOP10 استوار بوده انجام گرفته است. بدين ترتيب كه ژن شيگاتوكسين از سوش O157 با روش PCR تكثير شده(Amply fy) و سپس در ناقل (وكتور) مناسب كلون و پس از تاييد كلونينگ با روش PCR و تعيين ترادف در وكتورهاي مناسب بيان گرديد. پس از بيان زير واحد B و AB و A شيگاتوكسين در اين وكتور (pBADgIIIA) توكسين به شكل فعال A و AB5 و B5 به فضاي پري‌پلاسميك منتقل شده و مقدار قابل توجهي از هر كدام از اين زير واحدها توليد شدند. در حالي كه ساختار فضايي خود را حفظ كرده و سپس اثر اين توكسينها را بر روي سلولهاي Vero و HeLa و بررسي كينازهاي فسفريله كننده از طريق مهار كننده‌ها به وسيله كيت Tocriset و همچنين بررسي فاكتورهاي اختصاصي آپوپتوزيس مانند كاسپازها از جمله CSP3 توسط الكتروفورز و روش وسترن بلاتينگ انجام شد.

فصل اول: كليات. فصل دوم: مواد و روشها. فصل سوم: نتايج

10703